Электрофорез нуклеиновых кислот

Краситель ДНК NonTox/DNA-Dye NonTox - флуоресцентный краситель ДНК в 6Х буфере для нанесения образцов на гель. Используется для детекции двуцепочечной ДНК в УФ (300 нм) или синем (470 нм) свете как нетоксичный аналог бромистого этидия. Буфер также содержит красители для контроля подвижности ДНК в геле. Хранить при 2-8 °C, в защищенном от света месте, объем 1 мл. Буфер также содержит три красителя для контроля подвижности ДНК в геле во время электрофореза: бромфеноловый синий, ксиленцианол FF и Оранж G.

Реагент полностью удовлетворяет требованиям о защите окружающей среды и используется как безопасная альтернатива бромистому этидию. Кроме того, данный краситель не влияет на структуру и целостность молекулы ДНК.

Способ применения:

1. Встряхните краситель ДНК NonTox на вортексе 10 сек. перед использованием;

2. Смешайте 1 часть красителя и 5 частей анализируемого образца. Обратите внимание: краситель ДНК NonTox должен быть добавлен также в ДНК-маркер для его дальнейшей визуализации вместе с образцами после электрофореза;

3. Нанесите образцы на гель и поставьте электрофорез по стандартной методике;

4. После электрофореза переместите гель в трансиллюминатор под УФ или синий (470 нм) свет для визуализации бэндов.

Преимущества красителя ДНК NonTox:

Безопасность: отсутствие мутагенности и низкая токсичность красителя (LC >5000 мг/кг) по сравнению с бромистым этидием (LC - абсолютно смертельная концентрация - наименьшая концентрация вещества, при воздействии которой погибает 100% подопытных животных). Краситель оказывает незначительное воздействие на окружающую среду, соответствует актам о сохранении чистоты сточных вод (Clean Water Act (CWA)). Продукт безопасен для пользователя и освобождает от затрат, связанных с утилизацией отходов;

Чувствительность: аналогична бромистому этидию;

Влияние на ДНК: использование красителя ДНК NonTox позволяет минимизировать повреждения ДНК (в отличие от бромистого этидия, вызывающего повреждения цепи ДНК). Как следствие, трансформация плазмидной ДНК, окрашенной данным красителем, происходит с большей эффективностью по сравнению с ДНК, окрашенной бромистым этидием.

Простота использования: используется так же, как и 6х- буфер для нанесения. Не требует отмывки и дополнительного окрашивания и обладает низким фоновым свечением.

Характеристики:

Химическая формула, C₂₁H₂₀BrN₃;

Молярный вес, 394,33 г/моль;

Содержание основного вещества (титр.), мин. 98 %;

Точка плавления, 248-252 °C;

Растворимость (25 °C), (H2O), 40 г/л;

Максимальное поглощение (метанол), 524-527 нм;

Экстинкция E 0.001, 150-160 %/1 см;

Потери при высушивании, макс. 5,0 %;

рН (1% водный р-р при 20 °С), 4,5;

Раствор (водный 1%), прозрачный, красный;

NH4B, макс. 0,1 %;

Условия хранения, комнатная температура.

Характеристики:

CAS-No. 163795-75-3;

Бактериальная ДНК, не обнаруживается (мин. 40 циклов ПЦР);

Растворимость, растворим в ДМСО;

Длина волны возбуждения флуоресценции, 284 нм, 382 нм (УФ), 494 нм (голубой);

Длина волны испускания флуоресценции, 510 нм (зеленый);

Индекс риска (R) 26-22/68, 36/37/38, 68 вреден при попадании в дыхательные пути;

Индекс безопасности (S) 9, 36, 60;

Условия хранения, -20 °C, в темном месте.

Особенности:

Набор для определения длин фрагментов ДНК, в состав которого входит лиофилизованная смесь 17 фрагментов ДНК длиной от 100 до 5000 п.н. и 1-кратный буфер для нанесения;

Фрагменты длиной от 1500 до 5000 п.н. составляют до 40% от общей массы маркера;

Полоса, соответствующая фрагменту 500 п.н., отличается 2-кратной интенсивностью для удобства визуализации;

Лиофилизированная смесь стабильна при комнатной температуре в течение нескольких недель, после растворения рекомендуется разделить на аликвоты;

Рекомендуемое количество для нанесения на гель, 0,5-0,8 мкг суммарной ДНК;

Рекомендуемые условия электрофореза, 1,2-1,5% агарозный гель длиной 70-90 мм;

Условия хранения, -20 °С.

Особенности:

Маркер молекулярного веса ДНК AmpliSize содержит 13 фрагментов от 50 до 2000 п.н.;

Фрагменты: 50, 100, 200, 300, 400, 500, 700, 1000, 1500, 2000;

Имеет 50%-ное содержание GC-нуклеотидов в этих фрагментах, что исключает артефакты подвижности, связанные с нуклеотидным составом ДНК;

Предварительно смешан с буфером для нанесения;

Рекомендуемый объём для нанесения на гель, 5 мкл;

Условия хранения, +4 °С.

Особенности:

Маркер молекулярного веса ДНК EZ Load 100 bp содержит 10 фрагментов от 100 до 1000 п.н.;

Фрагменты: 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 п.н.;

Предварительно смешан с буфером для нанесения;

Рекомендуемый объём для нанесения на гель, 5 мкл;

Условия хранения, +4 °С.

Особенности:

Маркер молекулярного веса ДНК, EZ Load 1 kb содержит 15 фрагментов длиной от 50 до 2000 п.н., фрагменты: 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 8000, 10000, 15000 п.н.;

Имеет эталонные полосы (повышенной концентрации) при 5000 п.н., что облегчает идентификацию в геле;

Предварительно смешан с буфером для нанесения;

Рекомендуемый объём для нанесения на гель, 5 мкл;

Условия хранения, +4 °С.

Особенности:

Маркер молекулярного веса ДНК 2,5 kb содержит 14 фрагментов от 2500 до 35000 п.н. с шагом 2500 п.н.;

Фрагменты: 2500, 5000, 7500, 10000, 12500, 15000, 17500, 20000, 22500, 25000, 27500, 30000, 32500, 35000;

Имеет эталонную полосу (повышенной концентрации) при 10000 п.н., что облегчает идентификацию в геле;

Предварительно смешан с буфером для нанесения;

Рекомендуемый объём для нанесения на гель, 4 мкл;

Условия хранения, +4 °С.

Особенности:

Маркер длин ДНК EZ Load 20 bp содержит 50 фрагментов от 20 до 1000 п.н.;

Имеет эталонную полосу (повышенной концентрации) при 200 п.н., что облегчает ее идентификацию в геле;

Предварительно смешан с буфером для нанесения;

Рекомендуемый объём для нанесения на гель, 4 мкл;

Условия хранения, +4 °С.

Особенности:

Предназначен для нативного и денатурирующего электрофореза нуклеиновых кислот в агарозном и полиакриламидном гелях;

В отличие от ТАЕ-буфера, обладает большей буферной ёмкостью и теплоёмкостью, что делает его пригодным для длительного электрофореза;

Приготовлен на деионизованной воде (18 МОм);

1-кратный буфер содержит 89 мМ Трис, 89 мМ борную кислоту и 2 мМ ЭДТА, рН 8,3.