Технология Fireflyоснована на использовании технологии кодирующих микрочастиц , что обеспечивает возможность мультиплексирования при анализе микро-РНК на стандартном проточном цитофлуориметре. Данный подход позволяет детектировать до 68 мишеней в одной лунке.
Дополнительная нформация:
Области применения панелей Firefly:Онкология;Исследования стволовых клеток;Сердечно-сосудистые заболевания;Иммунология.
Преимущества метода:
Простота: не требует мучительного выделения РНК из образцов; Быстрый:подготовка к анализу всего за 1 час; Высокая чувствительность сопоставимая с ПЦР-анализом; Открытостьнаборов: наборы Fireflyможно использовать на любых проточных цитофлуориметрах с каналами детекции по Cy-3, Cy-5 и PE; Мультиплексность: детекция до 68 аналитов в 1 лунке; Высокая точность:каждая микроРНК детектируется несколькими типами частиц, что обеспечивает перекрытие данных по нескольким частицам.
Как происходит считывание?
Частицы Firefly выполнены из биоинертного гидрофобного пластичного материала и имеют размер 220 x 40 x 40 мкм. Такая форма и размер позволяет частицам беспроблемно проходить через проточные ячейки любых проточных цитофлуориметров. Материал частиц легко разрушается гидроксидом натрия, что позволяет без особых усилий при необходимости промыть ячейку.
Каждая частица содержит три различных функциональных области, каждая из которых отделена инертными спейсерами. В центральной области частицы содержаться РНК-зонды, комплиментарные к целевой микро-РНК. Два концевых участка исполняют кодирующую функцию.
Проточный цитофлуориметр детектирует каждую частицу как серию трёх сигналов.
При прохождении частицы через проточную ячейку проточного цитоофлуориметра, прибор детектирует серию из 3х сигналов от каждой частицы и определяет интенсивность сигнала.
Декодирование типа частицы и уровня сигнала осуществляется специализированным ПО.
Программное обеспечение Firefly Analysis Workbenchиспользует полученные данные для декодировния типа частицы и определения уровня микро РНК в пробе.
Интенсивность флуоресценции фикоэритрина (PE)-Cy5 из центрального участка определяет содержание той или иной микро РНК.
Проточный цитофлуориметр детектирует уровень сигнала центрального участка частицы. Интенсивность сигнала прямо пропорциональна уровню мкроРНК в образце.
Технология Fireflyпозволяет определять содержание до 68 микроРНК в одной лунке.
Смесь частиц Firefly, каждая из которых кодирует отдельный тип микроРНК, позволяет получить информацию о содержании до 68 типов микроРНК в каждой лунке 96-луночного планшета с 20-кратной репликацией.
Концевые участки для идентификации типов частиц:
два участка содержат флуоресцентный краситель Cy®3 с различной интенсивностью флуоресценции;
каждая из частиц, содержащая уникальный комплементарный к микро-РНК участок, имеет разную интенсивность флуоресценции.
Центральный (аналитный) участок:
содержит зонды к специфичной целевой микро-РНК;
захваченная целевая РНК красится флуоресцентными красителями PE-Cy5;
интенсивность свечения этого региона пропорционально концентрации микро-РНК в лунке.
ПанельПрофилирование клеточной микро РНКПрофилирование циркулирующей микро РНКОнкология- Рак груди-Рак лёгких-Рак простаты-Иммунология-Кардиология-Нейрология-Стволовые клетки-Клетки печени
