Синонимы:Acetic Acid Ammonium salt
Физические данные:порошок
Растворимость (20°C)1480 г/л(H2O)
Точка плавления:114°C
Химическая формула:CH3COONH4
Mолекулярная масса:77.08 г/моль
CAS-No.:631-61-8
HS-No.:29152900
EC-No.:211-162-9
Условия хранения:при комнатной температуре
Содержание основного вещества (титр.)мин. 98 %
pH (5 %; H2O)6.5 - 7.3 (25°C)
Тяжелые металлы (Pb)макс. 0.001 %
Водымкс. 2.5 %
Хлоридымакс. 0.002 %
Сульфатыmax. 0.005 %
A (1 cm/1 M в H2O)
260 nmмакс. 0.03
280 nmмакс. 0.02
Литература:
(1) Okayama, H. & Berg, P. (1982) Mol. Cell. Biol. 2, 161-170
High-efficiency cloning of full-length cDNA.
(2) Wallace, D.M. (1987) Methods Enzymol. 152, 41-48
Precipitation of nucleic acids.
(3) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995)Current Protocols in Molecular Biology, Pages 15.3.1-4 (Suppl. 17) Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York.
(4) Saporito-Irwin, S.M. et al. (1997) BioTechniques 23, 424-427
Protocol for the preparation of plasmid DNA, suitable for the transfection of mammalian cells.
Все ссылки описывают способы осаждения нуклеиновых кислот с использованием ацетата аммония (NH4OAc) вместо обычно используемого ацетата натрия. Исходные растворы изготавливают из 10 М (3, 770 г / л, фильтруют) или 7,5 М ацетата аммония (4).
Осаждение ДНК: Сделайте образец, содержащий ДНК, 2,5 М ацетата аммония, добавив 0,5 объема 7,5 М раствора аммония. Хорошо перемешать и добавить 2,5-3 объема (ДНК-образец + ацетат аммония) этанола (пример: 1 мл ДНК-содержащего образца + 0,5 мл ацетата аммония, хорошо перемешать, добавить 3,75-4,5 мл этанола). Хорошо перемешать и инкубировать в течение 10 минут на бане с сухим льдом или морозильником -70 ° C. Нуклеотиды и олигонуклеотиды не будут осаждаться, что будет соосаждать с ДНК, если используется ацетат натрия. Два последовательных осаждения удаляют 99% нуклеотидов и приводят к восстановлению ДНК более чем на 90%.
Качество ДНК, полученное в результате этого протокола, является достаточным для трансфекции клеток млекопитающих. Препарат намного лучше, чем очистка хлоридом цезия (3).
Внимание! Ацетат аммония не должен использоваться, если очищенная ДНК должна быть фосфорилирована, потому что ионы аммония будут ингибировать киназу.
Осаждение РНК: Добавить в 10 мл водный РНК-содержащий образец 0,1 объем 3 М NH4OAc (pH 5,5, 1 мл, конечный раствор 0,3 М) и смесь. Затем добавляют 27,5 мл (2,5 объема) этанола и перемешивают. Инкубируйте образец в течение 10 минут при -70 ° C на бане с сухим льдом или в морозильной камере. Ацетат аммония может быть заменой ацетата калия, когда РНК используется в бесклеточной системе трансляции.
