Среды для молекулярной биологии

Среда с низким содержанием триптофана и индуцирует промотор Pʟ; для культивирования штаммов E.coli GI724, GI826 и GI698, несущих ген-репрессор λ cI под контролем триптофанового промотора trp.Гидрофосфат натрия, г/л6,0Монофосфат калия, г/л3,0Казаминовые к-ты, г/л2,0Аммоний хлорид, г/л1,0Натрий хлорид, г/л0,5Магний хлорид, г/л0,095рН7,0±0,2 Растворите 12,6 г в 1л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, добавьте 25 мл стерильного 20 % раствора глюкозы и 1 мл ампициллина концентрацией 100 мг/л, храните при 4 °C.

Бульон YP применяется для культивирования дрожжей. Содержит глюкозу, соли и белки, необходимые для быстрого роста Saccharomyces cerevisiae.Триптон, г/л20,0Дрожжевой экстракт, г/л10,0рН7,0±0,2Растворите 30 г в 900 мл дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, добавьте 100 мл 20 % декстрозы, храните при 4 °C.

Среда с низким содержанием триптофана и индуцирует промотор Pʟ; для культивирования E.coli штаммов GI724, GI826 и GI698, содержащих промотор Pʟ.Казаминовые кислоты обеспечивают питательными веществами, необходимыми для роста и поддержания культуры E.coli. Благодаря высокому качеству гидролиза они являются богатым источником доступных аминокислот. Фосфаты необходимы для поддержания буферности системы. Натрий хлорид поддерживает необходимый осмос. Для инициации роста необходимо добавить глюкозу.Гидрофосфат натрия, г/л6,0Монофосфат калия, г/л3,0Казаминовые к-ты, г/л20,0Аммоний хлорид, г/л1,0Натрий хлорид, г/л0,5Магний хлорид, г/л0,095рН7,0±0,2Растворите 30,6 г в 900 мл дистиллированной воды, добавьте 20 мл 50 % глицерола и доведите до конечного объема 1000 мл, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, добавьте 1 мл ампициллина концентрацией 100 мг/л, храните при 4 °C.

Среда индукционная для повышенного бактериального роста с добавлением лактозы и глюкозы содержит источники углерода (лактозу и глюкозу), которые вызывают повышенный рост клеток и включают экспрессию с lac-промотора. Лимитированное количество глюкозы расходуется в основном на рост, предотвращая потребление лактозы обычно до середины-конца лог фазы. Как только запасы глюкозы истощены, лактоза может быть превращена β-галактозидазой в аллолактозу. Аллолактоза индуцирует экспрессию Т7 РНК полимеразы с lacUV5 промотора, в результате чего включается T7lac промотор и исследуемые белки экспрессируются с помощью Т7 РНК полимеразы. Благодаря этому повышенный рост клеток сменяется индукцией экспрессии белков. И нет необходимости следить за плотностью клеток, либо индуцировать экспрессию белков с помощью ИПТГ.Триптон, г/л35,0Дрожжевой экстракт, г/л20,0Сульфат аммония, г/л3,3Сульфат магния, г/л0,15Монофосфат калия, г/л6,8Гидрофосфат натрия, г/л7,1Лактоза-α2,0Глюкоза0,5рН7,0±0,2Растворите 74,85 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 20 мин при 115 °C, храните при 2-8 °C.

Среда для культивирования дрожжей содержит все необходимые витамины и неорганические соли, необходимые для культивирования дрожжей, кроме аминокислот, азота и углеводов.рН4,5±0,2Азотистая основа для дрожжей, г/л1,7Инозитол, мг/л2,0Ниацин, мг/л0,4Гидрохлорид тиамида, мг/л0,4Сульфат меди, мг/л0,04Монофосфат калия, мг/л1000Борная кислота, мг/л0,5Пиридоксина гидрохлорид, мг/л0,4Кальция пантотенат, мг/л0,4П-аминобензойная кислота, мг/л0,2Сульфат магния, мг/л500Сульфат марганца, мг/л0,4Сульфат цинка, мг/л0,4Хлорид железа, мг/л0,2Рибофлавин, мг/л0,2Хлорид кальция, мг/л100Калий йодид, мг/л0,1Молибдат натрия, мг/л0,2Биотин, мг/л0,002Фолиевая кислота, мг/л 0,002Натрий хлорид, мг/л100Растворите 1,7 г в 100 мл дистиллированной воды. Вы получили 10х стоковый раствор. Нагрейте до полного растворения, но не кипятите и не автоклавируйте! Стерилизуйте фильтрацией, храните при 4 °C.

Бульон YPD применяется для культивирования дрожжей. Он аналогичен бульону YP, но отличается добавлением декстрозы.Содержит глюкозу, соли и белки, необходимые для быстрого роста Saccharomyces cerevisiae. Пептон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами. Дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы. Бактериологический агар является желирующим агентом.Пептон, г/л20,0Дрожжевой экстракт, г/л10,0Декстроза, г/л20,0рН6,5±0,2Растворите 50 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, храните при 8-15 °C.

Бульон 2xYT применяется для размножения фага М13 или других бактериофагов. Также подходит для размножения E. coli. Богат азотом и другими необходимыми ростовыми факторами, что позволяет размножать бактериофаги в больших количествах без ослабления клетки-хозяина. E. coli растет быстрее на бульоне 2xYT благодаря содержанию в нем аминокислот, нуклеотидов, витаминов и других метаболитов.Среда индукционная на основе бульона 2xYT с добавлением лактозы и глюкозы содержит источники углерода (лактозу и глюкозу), которые вызывают повышенный рост клеток и включают экспрессию с lac-промотора. Лимитированное количество глюкозы расходуется в основном на рост, предотвращая потребление лактозы обычно до середины-конца лог фазы. Как только запасы глюкозы истощены, лактоза может быть превращена β-галактозидазой в аллолактозу. Аллолактоза индуцирует экспрессию Т7 РНК полимеразы с lacUV5 промотора, в результате чего включается T7lac промотор и исследуемые белки экспрессируются с помощью Т7 РНК полимеразы. Благодаря этому повышенный рост клеток сменяется индукцией экспрессии белков. И нет необходимости следить за плотностью клеток, либо индуцировать экспрессию белков с помощью ИПТГ.Триптон, г/л16,0Дрожжевой экстракт, г/л10,0Сульфат аммония, г/л3,3Сульфат магния, г/л0,15Монофосфат калия, г/л6,8Гидрофосфат натрия, г/л7,1Лактоза-α2,0Глюкоза0,5рН7,0±0,2Растворите 45,85 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 20 мин при 115 °C.

Бульон LB по Lennox богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E. coli.Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli. Дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы. Натрий хлорид поддерживает необходимый осмос.Среда индукционная на основе бульона LB по Lennox с добавлением лактозы и глюкозы содержит источники углерода (лактозу и глюкозу), которые вызывают повышенный рост клеток и включают экспрессию с lac-промотора. Лимитированное количество глюкозы расходуется в основном на рост, предотвращая потребление лактозы обычно до середины-конца лог фазы. Как только запасы глюкозы истощены, лактоза может быть превращена β-галактозидазой в аллолактозу. Аллолактоза индуцирует экспрессию Т7 РНК полимеразы с lacUV5 промотора, в результате чего включается T7lac промотор и исследуемые белки экспрессируются с помощью Т7 РНК полимеразы. Благодаря этому повышенный рост клеток сменяется индукцией экспрессии белков. И нет необходимости следить за плотностью клеток, либо индуцировать экспрессию белков с помощью ИПТГ.Триптон, г/л10,0Дрожжевой экстракт, г/л5,0Сульфат аммония, г/л3,3Сульфат магния, г/л0,15Монофосфат калия, г/л6,8Гидрофосфат натрия, г/л7,1Лактоза-α2,0Глюкоза0,5рН7,0±0,2Растворите 34,85 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 20 мин при 115 °C, храните при 2-8 °C.